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    前分光?后分光?你了解你的超微量嗎?

     紫外-可見(UV-Vis)分光光度計通過測量紫外和可見光波段的光吸收對樣品進行定量和鑒定。分光光度計的歷史前身可以追溯到1814年,當時約瑟夫·馮·弗勞恩霍夫(Joseph von Fraunhofer)(弗勞恩霍夫應用研究促進協會的贊助人)利用自己發明的分光光度計測量太陽光并發現太陽光譜中的574條暗譜線(弗勞恩霍夫線)。

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    而一臺商用紫外-可見分光光度計是阿諾德·貝克曼在1941年推出的,該儀器利用石英棱鏡將鎢燈發出的光分離為吸收光譜,并利用光電管(光電二極管的前身)記錄信號。為了說明光源和電子設備的背景影響,紫外-可見分光光度計測量通過樣品的光的強度,并自動減去背景,以提供代表樣品測定特性的精確讀數。

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    分光光度計發展到今天,已成為生命科學、醫藥科學、分析化學等領域重要的儀器。而超微量分光光度計的出現,讓分析所需的樣品量降低至微升級別,特別適合于生命科學珍貴樣品的的定量分析。Implen于2005年推出的Label Guard超微量比色皿,使任何用戶都可以在常規紫外分光光度計上進行微量樣品測量,而2006上市的Nanophotometer?系列超微量分光光度計,標志了“后分光“時代的開始。

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    微量紫外-可見分光光度計與常規的分光光度計相比,有著不同的設備結構,其特性是能夠于獲得全光譜分析結果,使得核酸、蛋白質等樣品可被定量及分析。常規分光光度計常采用前置分光器(如光柵),使光源發出的復色光分光為單色光,這能夠讓入射光保持很好的單色性,單色光穿過樣品池產生吸收,由二極管或倍增管檢測器檢測光強度。當光柵進行轉動時,就會有不同波長的單色光逐一通過樣品池,這時就可進行光譜掃描測量。

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    雖然在靈敏度、噪音、雜散光等方面具備優勢,但光譜掃描所需的時間往往是較長的,這并不太適合于生命科學樣品的定量及光譜分析。因此,目前市面上大多數的用于測量生命科學樣品的微量分光光度計采用的是相反的光學結構,即“后分光”形式。

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    由氙燈光源發出的復色光,通過樣品(微量或比色皿樣品),在相應的波長下分別產生吸收,減弱的復色出射光通過分光器進行分光,后由陣列式檢測器同時檢測所有波長對應的吸光值。陣列式檢測器通常為CCD,為長條形結構,每個像元組能夠精確的檢測對應的波長。因此,嚴謹的說,微量分光光度計的全光譜測量,是無需“掃描“的”,而是同時獲得的。

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    因此,微量分光光度計的核心部件中,氙燈替代了鎢燈氘燈組,后分光結構替代了前分光結構,陣列式CCD檢測器替代了光電二極管檢測器。在同時,也完全能夠滿足樣品測量準確性的要求,可謂是為大分子定量分析量身定制的儀器。而Nanophotometer?出眾的全光譜測量性能,也廣泛應用于分析化學領域。

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    后分光的結構還有其優勢,由于分光器是固定的,無需轉動進行光譜掃描,因此波長的穩定性是非常好的。而掃描式分光光度計必須考慮分光器轉動導致的波長漂移問題,需要定期檢測或調整。在后面幾期我們將介紹儀器的檢定問題,會具體介紹。

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    無論是前分光,還是后分光,都各具特點,也適合于不同的應用需求。充分的了解構造和原理,有助于您合理的選擇和正確的使用儀器。德國Implen 18年來一直專注于微量樣品吸光度測量領域,我們以豐富的制造和應用經驗為用戶提供有效的產品,也熱衷于分享知識與傳遞價值。Implen是值得您信賴的超微量品牌。



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